人恶性黑色素瘤细胞SK-MEL-2培养指南

一、细胞培养条件

细胞名称：人恶性黑色素瘤细胞SK-MEL-2

生长特性：贴壁生长

冻存条件：使用无血清冻存液（编号：C7001）

培养体系：1640培养基 + 10% FBS + 1% 双抗

传代建议：首次传代比例为1:2

传代情况：每2天更换培养基

备注：请使用无菌离心管收集培养基，以便进行对比培养。如果对比培养效果不理想，建议直接购买我们的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

当细胞状态良好后，建议将其灌满完全培养液并封好瓶口，这是运输细胞的最佳方法。收到细胞后，请用75%酒精喷洒整个细胞瓶，以实现消毒，随后在超净工作台内进行严格的无菌操作。接着，将细胞瓶放入37℃、5% CO2培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态，然后进行后续处理。

请使用显微镜观察细胞的生长情况，并不同倍数拍照保存（建议拍摄40x, 100x, 200x各一张）。前三天的照片是重要的售后依据，如未提供照片，默认细胞状态良好。（注意在放入培养箱时，确保培养瓶的盖子松动。）

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

如果细胞未超过80%的汇合度，请将瓶中的完全培养液收集至离心管中，保留5ml完全培养基并放入37℃、5% CO2孵箱中培养。若细胞密度超80%，则需进行传代培养，具体步骤如下：

1. 去除培养上清，再用不含钙、镁离子的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞情况。若细胞大部分变圆并脱落，迅速回到操作台，轻敲培养瓶后加入超过5ml完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，然后将细胞悬液转移至15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），并补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中继续培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至80%覆盖培养瓶面积时，请弃去T25培养瓶内的培养液，并用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，观察细胞变圆后加入5ml完全培养液以终止消化，然后轻轻吹打细胞使其脱落，再将悬液转移至15ml离心管，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，加入1ml雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，如需转入液氮罐，应先在-80℃冰箱存放24小时以上。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），迅速置入37℃水浴中解冻至无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外表。
2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，使用5ml完全培养基重悬细胞，并接种至T25培养瓶，放入37℃、5% CO2细胞培养箱中继续培养。
4. 第二天，请更换为新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

有些细胞可能在运输过程中因贴壁不牢而脱落，这属于正常现象。可参考以下方法：收集培养瓶内的所有培养液至离心管，进行1000 RPM离心5分钟，收集上清作后续对比培养的过渡使用，沉淀后加入1-2ml胰酶，轻轻吹打使细胞重悬并消化1-2分钟，之后加入5ml完全培养基终止消化，再次离心以去除上清后加入新培养基重悬。最后，按1:2比例分瓶进行传代，并补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

五、售后条款

如细胞出现问题，符合以下重发条件：

1. 运输途中的问题，如细胞丢失、瓶身破损、严重漏液等，均可重发。
2. 如收到细胞后48小时内发现污染，提供真实实验结果后核实可重发。
3. 常温运输的细胞，在静置24小时后或干冰运输的细胞复苏后24小时内，大多数细胞未存活且提供清晰细胞状态照片，将予以重发。
4. 如出现污染问题，可根据具体情况及技术人员判断进行重发。

对于由客户导致的问题，如细胞污染、错误操作、某些特殊服务及不符合推荐条件的细胞，将不予重发。购买者在收到产品的第2、3天需拍照以做售后依据，超过则视为产品合格。

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