肠道类器官作为一种高度模拟真实肠道结构与功能的体外模型，已成为生物医疗领域中研究肠道生理、病理及疾病机制的重要工具。小鼠肠道类器官的培养过程需要精确控制培养条件和细胞因子的添加，各个阶段所需的细胞因子也有所不同。

一、初始培养阶段

在初始培养阶段（干细胞增殖），所使用的培养基为基础培养基（如DMEM/F-12）。在此阶段，关键的生长因子包括：

• Wnt-3a：激活Wnt信号通路，维持干细胞的自我更新。
• R-spondin-1：增强Wnt信号，促进干细胞增殖。
• EGF（表皮生长因子）：促进细胞增殖。

同时，抑制因子的使用也至关重要，例如Noggin，它可以抑制BMP信号，维持干细胞的未分化状态。

二、分化诱导阶段

在分化诱导阶段，继续使用DMEM/F-12等基础培养基。此时，引入ActivinA和FGF2，以促进内胚层的形成。中期 добавl加入IL-22以促进潘氏细胞的分化，同时CHIR99021（GSK3β抑制剂）则用于调控Wnt信号通路，促进细胞分化。在此阶段，可以适当降低EGF的浓度，以避免对细胞增殖的过度刺激。

三、维持与长期培养阶段

类器官分化完成后，进入维持与长期培养阶段，此时的培养基调整旨在保持类器官的稳定性和功能。继续使用适合的基础培养基，同时根据需要调整Wnt信号通路的活性，例如适当调整Wnt-3a和Noggin的浓度。此外，需要逐渐减少或去除ActivinA、FGF2等分化诱导因子。

四、培养注意事项

在培养过程中，应注意以下事项：

• 培养基更换频率：通常每2-3天更换一次，以确保充足的营养成分及代谢废物的及时清除。
• 监测类器官状态：定期观察类器官的形态与生长状态，并及时调整培养条件。
• 无菌操作：整个培养过程需严格遵循无菌操作规范，以避免污染。

通过上述阶段性培养基的调整，可以有效诱导小鼠肠道类器官的成功分化，并维持其长期稳定的培养。值得一提的是，尊龙凯时不仅提供上述小鼠肠道类器官培养所需的基础培养基和细胞因子，还推出了现成的小鼠肠道类器官培养基套装3DCultrIntestinalOrganoidGrowthMedium(Mouse)，旨在为生物医疗研究提供更便捷的选择，助力您在科研道路上更进一步。